鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘鸿威

作者： 刘鸿威;林昶;王劭;肖世峰;程晓霞;郑敏;陈少莺;曾显成;陈仕龙

作者机构：

关键词： 鸭;骨形态发生蛋白（BMPs）;荧光定量PCR;SYBR GreenⅠ

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1509-1518

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白（BMPs）mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增，产物回收后克隆至pMD-18-T载体，构建阳性重组质粒作为标准品，优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件，建立其标准曲线，对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强，无引物二聚体及非特异性产物，熔解曲线为单峰，相关系数R2均大于0.998，组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平，结果显示，BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高，分别为5.5×10~4、 1.1×10~5、 5.1×10~5和7.7×10~5拷贝·μL-1; BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高，分别为7.5×10~4和7.6×10~3拷贝·μL-1；而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高，分别为1.5×10~5、2.1×10~4、1.8×10~3和3.3×10~3拷贝·μL-1。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好，为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。

分类号： S834.2

  • 相关文献

[1]转基因大麦B-hordein基因荧光定量PCR方法的建立. 李静雯,张正英,王立光,陈军,朱天地. 2020

[2]鸡毒支原体SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立. 孙俊颖,刘志成,孙敏华,李冰玲,沈海燕. 2015

[3]猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立. 李鹏,郭军庆,金前跃,李青梅,李清州,万博,王选年,王川庆,张改平. 2014

[4]马疱疹病毒1型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立. 王征,郭巍,姬媛媛,曲娟娟,赵立平,李红梅,相文华. 2012

[5]鸭IFN-γ,IL-2 mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用. 张盼涛,曾显营,杨婧,李倩倩,田国彬,陈化兰. 2013

[6]猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立. 李玉明,王刚,汪志艳,刘永刚,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,王延群,蔡雪辉. 2013

[7]J亚群禽白血病SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立. 王莉,黄安宁,李槿年,张丹俊,刘雪兰. 2013

[8]水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用. 张秀丽,于慧娟,徐超,张桉潮,宋兴超,郝俊伟,赵家平,杜锐. 2014

[9]美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 孔文迪,陈曦,杨金先,葛均青. 2024

[10]鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用. 张飘,贺欣薇,杨霞,曾茂芹,刘妍罕,张扬子,杨颖,温贵兰,程振涛,文明. 2021

[11]鸭坦布苏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法的建立. 万春和,朱海侠,施少华,黄瑜,程龙飞,傅光华,陈红梅. 2013

[12]牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,杨井泉,姚守秀,黄新,薄新文,钟发刚. 2010

[13]牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,蔡日鹏,黄新,何延华,薄新文. 2011

[14]牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 韩猛立,何延华,黄新,宋天增,薄新文,钟发刚. 2010

[15]禽传染性法氏囊病实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 张伟业,薛俊龙,常亚琦,刘昊,任静强. 2018

[16]猪流行性腹泻病毒SYBRⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立. 修金生,周伦江,陈如敬,王隆柏,陈小权. 2012

[17]猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 沈学怀,潘孝成,巩雅静,张丹俊,赵瑞宏,胡小苗,戴银,侯红艳,周学利,朱传民. 2014

[18]丝状支原体山羊亚种SYBR Green ⅠqRT-PCR快速检测方法的建立. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,游伟,胡奇林. 2017

[19]甘薯卷叶病毒LAMP快速检测技术的建立及应用. 李华伟,刘中华,张鸿,许泳清,李国良,林赵淼,许国春,邱永祥,纪荣昌,罗文彬,汤浩,邱思鑫. 2019

[20]3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 王凤雪,黄双,刘莹,杨勇,孙娜,朱洪伟,张淑琴,程世鹏,温永俊. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序