牛病毒性腹泻病毒E2蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘鑫欢

作者： 刘鑫欢;何苗锋;张纹纹;程子龙;毛立;杨蕾蕾;刘茂军;白娟;李文良

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E2蛋白;阻断ELISA;单克隆抗体;中和试验

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 43 卷 012 期

页码： 2457-2462

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白抗体的阻断ELISA方法,以BVDV-1重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的BVDV-1 E2蛋白的单克隆抗体作为检测抗体,经过一系列的条件筛选与优化,建立阻断ELISA方法,并对该检测方法的特异性、敏感性和与中和试验结果的符合率进行测定.经优化后的最佳反应条件:抗原包被质量浓度为0.25 mg/L;酶标单抗稀释度为1∶2 000,37℃孵育1 h;待检血清稀释度为1∶8,37℃孵育1.5 h;37℃避光显色10 min.使用该方法对87份BVDV阴性牛血清进行检测,确定当待检血清的阻断率≤ 21.13%时,该血清为阴性;阻断率≥ 26.86%时,该血清为阳性.该方法检测BVDV-2、边界病病毒、猪瘟病毒、牛副流感病毒3型、口蹄疫病毒、布鲁菌、副结核及牛支原体阳性血清均无交叉反应;最低可检出中和效价为8的阳性血清.用该方法检测105份临床血清样品,与血清中和试验总符合率为93.33%,且阻断率与中和抗体效价呈正相关.上述结果表明,本研究建立的阻断ELISA方法特异性好、灵敏度高、操作简便,为BVDV流行病学调查及免疫效果评估提供了一种新的技术手段.

分类号： S852.65

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