快速小量提取小麦叶片DNA的一种简易方法(摘要)(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王敏

作者： 王敏;那冬晨;姬虎太;张定一

作者机构：

关键词： 小麦;DNA提取;简便快速

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2009 年 05 期

页码： 40-41+81

摘要： [目的]寻求少量、快速提取小麦幼叶DNA的方法。[方法]以小麦幼叶(只要是健康的绿叶,老叶也可)为试验材料,用改良的CTAB法小量快速提取转基因小麦总DNA。具体步骤为:①直接用已灭菌的1.5ml离心管夹取小麦叶片(无需称量),然后在液氮中快速冷冻后用玻璃棒研磨成细粉(研磨直接在离心管中进行,不必先在研钵中研磨然后再转移到离心管里,能够有效减少材料损失),加入600μl预热(65℃)的2%CTAB提取缓冲液,快速振荡摇匀。置于65℃的水浴锅中温育30min,期间温和混匀几次。②取出离心管,冷却至室温,加入600μl氯仿:异戊醇(24:1)充分混匀,于4℃下12000r/min离心8min(只抽提1次)。③取上清,加入等体积预冷的异丙醇,缓慢混匀,至有絮状DNA析出,-20℃放置30min以上。④4℃下12000r/min离心8min。弃上清液,将沉淀用700μl70%乙醇清洗2次,离心,弃乙醇,室温下挥发乙醇,加入适量ddH2O或0.1×TE溶解沉淀(DNA),-20℃保存。所提取的DNA以0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]改良的CTAB法提取小麦基因组DNA所提取的DNA纯度高、无降解现象,适用于进行常规PCR扩增,并且需要材料量少、成本低,还可缩短操作周期、节省时间。[结论]该研究为小麦DNA的提取提供了一种所需材料量少、简便、快速的方法。

分类号： S512.1

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