共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李炯

作者： 李炯;刘艳红;刘湘涛;尚佑军;刘俊林;安芳兰;殷宏

作者机构：

关键词： 逆转录病毒载体;口蹄疫病毒;衣壳蛋白;MDBK细胞

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2008 年 48 卷 11 期

页码： 1520-1525

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞（Madin-Darby bovine kidney，MDBK）株。【方法】采用聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因，将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达，并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株，衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。

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