莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李亚军

作者： 李亚军;罗秋兰;费小雯;邓晓东

作者机构：

关键词： Femu2p;莱茵衣藻;重叠延伸PCR;基因克隆;原核表达;缺铁应答

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 18-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]克隆莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p,构建重组表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,优化条件使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。[方法]提取莱茵衣藻CC425的总RNA后,利用RT-PCR和两次重叠延伸PCR相结合的方法获得Femu2p的全长编码区,构建原核表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,并将其转入大肠杆菌DL21(DE3)中,利用IPTG诱导融合蛋白的表达并优化表达条件。[结果]Femu2p的全长编码区为2 904 bp,编码967个氨基酸,理论分子量为100.4 k Da,理论等电点为8.86。序列分析结果显示该蛋白属于包含多个C2H2类型锌指结构域的Ran BP2家族。IPTG诱导融合蛋白表达的最佳条件为:IPTG浓度0.25 mmol/L,诱导温度16℃,诱导时间8 h。[结论]成功克隆了Femu2p基因的全长编码区,并使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。

分类号： Q943.2

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