猪流行性腹泻病毒非结构蛋白Nsp15互作宿主蛋白的筛选及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙金磊

作者： 孙金磊;于瑞明;张莉萍;张中旺;王永录;潘丽;张全伟;刘新生

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻;非结构蛋白;蛋白互作;病毒复制

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年 40 卷 012 期

页码： 4533-4545

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了筛选和鉴定与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)非结构蛋白15(non-structural protein 15,Nsp15)互作的关键宿主蛋白,通过IP/pull-down beads结合质谱技术筛选、鉴定与PEDV非结构蛋白Nsp15 互作的宿主蛋白,并利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)、激光共聚焦验证其互作关系,最后应用 Western blotting 和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)初步明确宿主蛋白SLC25a3 与PEDV之间的作用关系.本研究成功构建了 Nsp15 重组真核表达载体 pcDNA3.1(+)-Flag-Nsp15,并筛选出与PEDV Nsp15 互作的宿主蛋白SLC25a3.免疫共沉淀及激光共聚焦结果显示PEDV Nsp15 与宿主蛋白SLC25a3 存在互作关系.宿主蛋白SLC25a3 能够显著抑制PEDV复制且呈现剂量依赖性.本研究为进一步探究SLC25a3 在抗PEDV免疫应答中的作用及机制提供了参考.

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