重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张念章

作者： 张念章;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;逯忠新

作者机构：

关键词： 副猪嗜血杆菌;重叠PCR;外源打靶基因

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 07 期

页码： 186-190

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coliSM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。

分类号： S852.61

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