草莓白化伴随病毒RT-LAMP检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王涌

作者： 王涌;曾祥国;肖桂林;温昕;周鑫鑫;邓江丽;韩永超

作者机构：

关键词： 草莓白化伴随病毒;反转录环介导等温扩增;可视化;快速检测

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2024 年 50 卷 006 期

页码： 237-245,253

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 草莓白化伴随病毒（strawberry pallidosis-associated virus, SPaV）能引起草莓白化病，与其他病毒复合侵染后会加重症状。本研究建立了SPaV的反转录环介导等温扩增方法（reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）,对反应体系的各条件进行评估优化后，检测了RT-LAMP的特异性和灵敏度，且对田间样品进行了测试。结果表明，优化后的反应体系包含2.5μL 10×Isothermal Amplification Buffer、6 mmol/L Mg2+、1 mmol/L dNTPs、1μmol/L SPaV-FIP和SPaV-BIP,0.1μmol/L SPaV-F3和SPaV-B3,0.3μmol/L SPaV-LB,0.4 mol/L Betaine, 0.256 U/μL WarmStart Bst 2.0 DNA Polymerase, 0.12 U/μL WarmStart RTx Reverse Transcriptase, 1μL RNA,反应条件为61℃恒温孵育40 min。采用优化后的反应体系，在特异性检测中，只有携带了病毒SPaV的样品才能发生阳性扩增。灵敏度测试中，RT-LAMP比RT-PCR灵敏度高10倍。田间应用中，RT-LAMP和RT-PCR检测结果一致。本研究建立的SPaV RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异，可供实验室及生产实践中应用，助力脱毒种苗的鉴定和田间病毒病调查。

分类号： S436.68

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