马铃薯α-淀粉酶在毕赤酵母中的表达、纯化及其酶学性质的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王永刚

作者： 王永刚;马燕林;马建忠;马雪青;任海伟

作者机构：

关键词： α-淀粉酶;马铃薯;毕赤酵母;表达与纯化;酶学性质

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2014 年 34 卷 09 期

页码： 56-62

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR法扩增马铃薯夏波蒂的α-淀粉酶成熟肽基因,将其亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9k上,SacII线性化重组表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建重组酵母GS115/pPIC9k-amy,利用锥虫蓝法筛选获得高活性转化子(GSamyA5),以终浓度为0.5%甲醇诱导该重组菌表达α-淀粉酶,通过Ni~(2+)-NTA agarose亲和层析纯化,并对其酶学性质进行研究。结果表明:该酶的最适反应温度为45℃,40~50℃酶活较稳定,保温50 min,残留相对活力达92.6%;最适反应pH值为6.0,并在pH 6.0~7.0范围内酶活保持稳定。Ca~(2+)、K~+可促进酶反应,以Ca~(2+)影响为最,相对酶活力提高到125%;Cu~(2+),Fe~(2+),Fe~(2+),Zn~(2+)对该酶有显著抑制作用;Mn~(2+),Mg~(2+)对酶有微弱抑制作用,Li~+、Na~+对酶活影响不大。

分类号： Q78

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