钩藤UrLAMT基因及其启动子的克隆与分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李永权

作者： 李永权;刘淼;上官黎阳;王晓红;胡涛;唐柳;张明生

作者机构：

关键词： 钩藤;马钱苷酸甲基转移酶;基因克隆;启动子克隆;酵母单杂交

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2024 年 52 卷 002 期

页码： 145-154

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础.[方法]基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系.[结果]克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1 137 bp,共编码378个氨基酸.UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近.UrLAMT启动子序列长度为1 141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用.[结论]获得了 UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导.

分类号： Q781

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