鸡柔嫩艾美耳球虫HN株3-1E基因的原核表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张艳

作者： 张艳;刘海隆;曹宗喜;林哲敏;谭树义

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;海南株;3-1E基因;原核表达

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2015 年 47 卷 01 期

页码： 33-37

收录情况： 北大核心

摘要： 根据已报道的柔嫩艾美耳球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到1条特异片段,将扩增产物克隆至p MD-18T载体,转化感受态菌JM109,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与已发表的国内外相关虫株的3-1E基因序列比较,核苷酸的同源性均在99.2%~99.8%,氨基酸的同源性均在98.2%~100%。然后将重组质粒和表达载体p GEX-4T-1分别用Xho I和EcoR I酶切后构建重组表达载体p GEX-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量为44.7 ku,诱导表达5 h的蛋白表达量可达到30%以上。

分类号： S858.31

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