文献类型： 中文期刊
第一作者： 魏彩虹
作者： 魏彩虹;王皓;杜立新;李发弟
作者机构：
关键词： 成肌细胞;原代培养;分化;肌肉发育;绵羊
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2012 年 20 卷 03 期
页码： 283-288
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 成肌细胞(myoblast cell)是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞,具有自我更新和促进肌纤维再生的能力,是体外研究肌肉发育调控机理的理想载体。本研究采取成年乌珠穆沁羊(Ovis aries)的背最长肌组织,结合使用胶原酶消化和差速贴壁两种方法分离纯化羊成肌细胞,并应用CCK-8法检测细胞生长曲线,苏木素-伊红染色与定量PCR检测成肌分化效果。结果显示,分离的细胞接种到培养瓶中24h后,高折光性亮圆形细胞开始贴壁,少量细胞有小突起。培养48h后,出现大量长梭形细胞,部分细胞伸出突起呈星型,细胞胞浆丰富。细胞生长曲线显示,成肌细胞符合正常生长规律,细胞传至第三代后用于CCK-8试剂盒检测,经分析后发现细胞符合正常生长规律,生长曲线近似S形,3d后开始进入对数生长期,第3~8天增殖迅速,第8天后细胞增殖速度减缓,第9天基本进入平台期。成肌诱导5d后,大量成肌细胞开始从单个核期进入合体细胞阶段,融合成核位于中央的多核性长竹状初生肌管。随后逐渐规律性地沿一个方向平行排列,形成多核的肌管。定量PCR结果显示,MSTN(myostatin)、FST(follistatin)、BTG2(B-cell translocation gene2)与BTG3(B-cell translocation gene3)在成肌细胞分化过程中有不同程度表达,存在阶段特异性。MSTN与FST随分化时间推移表达量逐渐降低,但FST基因表达量显著高于MSTN基因(P<0.05);分化期成肌细胞的BTG3表达极显著高于未分化期(P<0.01),而BTG2的表达则显著低于细胞未分化状态(P<0.05)。研究结果提示,本研究分离的羊成肌细胞具有肌源性,可分化为肌管;BTG2与BTG3两基因呈相反趋势表达,可能说明基因在肌肉发育过程中起不同作用。
分类号： S826
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