H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 夏胜男

作者： 夏胜男;庄忻雨;田明尧;陈璐儿;狄亚心;杨松慧;许智强;于潼;朱光泽;秦爱建;金宁一

作者机构：

关键词： H1N1亚型流感病毒;mRNA疫苗;血凝素HA;密码子优化;体外转录系统

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 254-259

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 从mRNA序列优化和体外转录（IVT）系统优化角度，设计2条基于血凝素（HA）基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗，分别连接到3种体外转录系统（含不同UTRs序列）中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定，并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法 确保抗原基因（HA）氨基酸序列不变，以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化，分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα（UTRs来自人源α球蛋白）、pGEM-T7-Mα（UTRs来自鼠源α球蛋白）、pGEM-n3（UTRs来自人源β球蛋白）上，通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理，获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定目的蛋白的表达。结果 成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白，以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论 抗原的设计具有可行性，筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著，可能在动物免疫效果上能够体现。

分类号： R392-33

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