利用亚硝基胍诱变和高通量测序技术分析疯草内生真菌产SW生物合成通路

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郝宝成

作者： 郝宝成;宋向东;高艳;王学红;刘宇;陈柯源;梁妍;胡毓瑶;邢小勇;温峰琴;胡永浩;梁剑平

作者机构：

关键词： Alternaria Section Undifilum oxytropis;亚硝基胍;诱变筛选;高通量测序;生物合成通路

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 169-182

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 阐明产苦马豆素(swainsonine,SW)疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis中SW的生物合成通路,可以为生物发酵获得大量SW用于抗肿瘤应用和疯草的脱毒育种奠定理论基础和技术支撑。采用不同作用剂量的化学诱变剂亚硝基胍,在28℃,120r·min~(-1)与Alternaria Section Undifilum oxytropis孢子悬液分别作用5、10、15、20、25、30min,选取生长良好的菌株接种PDA培养基,连续培养发酵24d,应用α-甘露糖苷酶活性分析法检测菌丝及发酵液中SW含量,评价其传代及产SW稳定性。联合使用玻璃珠、液氮破壁法预处理菌丝,选用真菌基因组提取试剂盒提取原始菌株和突变株D4基因组DNA,经纯化、酶切、构建菌株DNA文库,并应用荧光定量PCR法检测评价文库构建质量,利用Ion torrent PGM~(TM)测序平台进行突变株和原始株高通量全基因组测序。结果表明,经化学诱变成功获得1株突变株D4,利用MIRA软件对高通量测序序列拼接、组装,分别获得突变株D4和原始株相关基因组片段19、21条,经BLAST、GO分析,注释到AlternariaSection Undifilum oxytropis生物合成SW的关键基因SwnK、SwnH2、SwnH1、SwnR和关键酶putative amino acid transporter、pyrroline-5-carboxylate reductase、formate/glycerate dehydrogenase catalytic、saccharopine reductase-like protein,并结合KEGG数据库,预测了AlternariaSection Undifilum oxytropis产SW可能的生物合成通路。本研究为揭示AlternariaSection Undifilum oxytropis生物合成SW机制作出了新的探索尝试。

分类号： S859.8

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[1]产苦马豆素疯草内生真菌Alternaria SectionUndifilum oxytropis的诱变筛选. 郝宝成,宋向东,高艳,王学红,刘宇,李元曦,梁妍,陈柯源,胡毓瑶,邢小勇,胡永浩,梁剑平. 2019

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