抗禽流感病毒(H5N1)入胞单分子抗体过表达慢病毒载体的构建及其稳转细胞株的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王瑜

作者： 王瑜;孙赫;岳玉环;吴广谋;张国利;邱月;蔄弘扬;田园;李泽鸿

作者机构：

关键词： 单分子抗体;慢病毒载体;Western blot;转染

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 42 卷 009 期

页码： 1769-1774

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建过表达抗禽流感病毒(H5N1)M1蛋白入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的慢病毒载体,筛选获得稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T稳转细胞株.PCR扩增目的基因,将其插入质粒pLVX-mCMV-ZsGreen1-Puro中,构建pLVX-TAT-ScFv-mFc-ZsGreen1-Puro慢病毒过表达质粒,对重组质粒进行慢病毒包装后使用转染试剂复合物转染HEK293T细胞系,并使用嘌呤霉素(Puro)筛选阳性表达细胞,经过扩大培养及裂解后,以ProteinG纯化目的蛋白并对蛋白纯品进行鉴定.Western blot检测结果显示,成功获得了稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T细胞株.ELISA、SDS-PAGE、BCA结果显示成功获得预期目的蛋白2 mL(0.39 g/L).结果表明,本研究成功建立了稳定表达抗H5N1病毒抗体的293T细胞系,为进一步研究TAT-ScFv-mFc的功能结构奠定了基础,也同时为真核表达系统的抗体制备研究提供了参考依据.

分类号： S852.65

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