黑芝麻多酚氧化酶的重组表达及其酶学特性

文献类型： 中文期刊

第一作者： 叶彩燕

作者： 叶彩燕;刘光;杜念;张瑞芬;刘磊;贾栩超;张名位

作者机构：

关键词： 黑芝麻多酚氧化酶;大肠杆菌;原核表达;亲和纯化;酶学性质

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2021 年 012 期

页码： 4395-4405

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为明确黑芝麻多酚氧化酶的酶学性质,利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达了黑芝麻多酚氧化酶（Black sesame polyphenol oxidase,BsPPO）。将合成的基因构建至pMAL-c5x载体,并在大肠杆菌中进行表达,对重组蛋白进行分离纯化及融合标签切除,获得的BsPPO蛋白用于酶学性质探究。结果表明,合成的Bsppo基因1 752 bp,编码585个氨基酸,理论蛋白分子量为65.3 kDa;构建的pMAL-c5x-Bsppo重组质粒在大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）中可溶表达了MBP-BsPPO蛋白;酶切去除MBP融合标签后对BsPPO进行了酶学性质研究,结果表明BsPPO的最适温度和pH分别为25℃和4.0,在低温和弱酸性环境中有较好的稳定性。短时间低强度的光照和Cu2+可激活BsPPO的活性,Zn2+和Ca2+能抑制其活性。BsPPO可催化单酚、二酚以及三酚类化合物,对L-酪氨酸以及香草酸表现出较高的催化活性,此外BsPPO还对黑芝麻中含有的2-甲氧基肉桂酸、吲哚3-羧酸和根皮素表现出良好的催化活性。研究结果为黑芝麻多酚氧化酶酶学特性的明确奠定了理论基础。

分类号： TS201.2

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