文献类型： 中文期刊
第一作者： 吴梦丽
作者： 吴梦丽;孙华林;杨吉飞;赵亚茹;关贵全;殷宏;牛庆丽
作者机构：
关键词： 非洲猪瘟病毒;BRD4;BD1/2;3D4/21细胞;稳定表达细胞系
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2024 年 55 卷 010 期
页码： 4646-4659
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4（bromodomain-containing protein 4, BRD4）有助于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）的复制，为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响，通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域，利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系，分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先，以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标，构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装，获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选，成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平，并通过HAD50 测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明：成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比，BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料，并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。
分类号： S858.28
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