基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周洁

作者： 周洁;王栩鸣;陈斌;陈娟;杨勇;余初浪;严成其;陈剑平

作者机构：

关键词： 入门载体;BiFC;基因互作;Gateway

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2013 年 25 卷 05 期

页码： 1024-1030

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。

分类号： S188

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