ORFV和Mo双重PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林裕胜

作者： 林裕胜;江锦秀;江斌;游伟;胡奇林

作者机构：

关键词： 羊传染性脓疱病毒(ORFV);绵羊肺炎支原体(Mo);双重PCR

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 1374-1380

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此两种病原混合感染日益增多,目前采用单一PCR方法检测这两种病原,临床上迫切需要能同时快速检测这两种病原的方法。为了建立能够直接从样品中同时检测ORFV核酸和Mo核酸的双重PCR方法,本研究根据ORFV的主要膜蛋白B2L基因(major envelope protein B2L gene)和Mo的膜蛋白P80基因(membrane protein P80 gene)序列,设计合成了2对特异性引物。结果显示,该方法可以同时扩增出ORFV的402 bp和Mo的700 bp特异性片段,而对其他常见病原的DNA模板均无扩增,显示出良好的特异性,该方法对ORFV和Mo的最低检出量分别为1.1×10~3copies/μL和3.47×10~3copies/μL,比单一PCR敏感10倍。对来自福建省部分羊场的883份病山羊(Capra hircus)临床样品进行检测,双重PCR检出ORFV阳性样品28份(阳性率为33.7%),Mo阳性样品33份(阳性率为39.8%),同时感染ORFV和Mo的阳性样品9份(阳性率为10.8%),检测结果与单一ORFV和Mo PCR结果一致。本研究所建立的双重PCR方法可用于ORFV和Mo的临床检测,为CE和MPGS的临床快速鉴别诊断和流行病学调查提供了有效的方法。

分类号： S852.65

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