绵羊精子RNA提取方案的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任秀美奥

作者： 任秀美奥;姚旭东;蒙亚琦;郭延华;唐红;张译元;王立民;周平

作者机构：

关键词： 绵羊精液;RNA提取;Percoll溶液;PBS溶液;鱼精蛋白1;上皮细胞钙黏蛋白;TRIzol

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 009 期

页码： 62-67,141

收录情况： 北大核心

摘要： 为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染.结果表明:用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低.Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低.两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1基因,未检测出CDH1基因.说明Percoll密度梯度离心法纯化精子结合TRIzol(65℃)+试剂盒法提取精子RNA效果较好,无体细胞污染,且纯度较高.

分类号： S813.1

  • 相关文献

[1]木薯总RNA提取初步研究. 张根良,王文泉. 2008

[2]牛精子蛋白质组学技术平台的建立及冻融前后精子差异蛋白初步分析. 陈龙,朱化彬,沙里金,韩伟东,王栋,王宗礼,郝海生,杜卫华,程金华. 2008

[3]核桃叶片总RNA提取方法的比较研究. 陈新,刘洪对,贾建云,徐丽,张力思,刘庆忠. 2014

[4]甘蔗茎RNA提取方法的比较. 范业赓,赵晓艳,何龙飞,黄荣韶,杨丽涛,李杨瑞. 2007

[5]3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较. 孙国胜,马志虎,戴忠良,毛忠良,孙春青,潘跃平. 2016

[6]马铃薯试管苗总RNA的提取及质量分析. 李飞,何昀昆,张敏,刘杰. 2008

[7]玉米双低频酶cDNA-AFLP体系的建立. 宋欣,杨文鹏,赵德刚. 2008

[8]成熟油菜次生休眠种子RNA的快速高效提取方法. 赵祥祥,刘福霞,唐瑭,赵祥强,王兴龙. 2013

[9]一种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总RNA提取方法. 伍国强,席杰军,周向睿,马清,王锁民. 2008

[10]富含多酚类植物RNA提取的研究进展. 刘芳,官春云. 2015

[11]3种烟草RNA高效提取方法的比较. 张震彪,宋希云,郭新梅. 2016

[12]改良CTAB方法提取果树不同组织的RNA. 关玲,赵密珍,王庆莲,吴伟民,钱亚明,巫建华. 2018

[13]甘蓝型油菜G3PDH和PK基因对氮肥的响应. 周晓婴,付三雄. 2019

[14]高寒区牛内脏组织的采集及其RNA的贮存. 侯明杰,张霞,石福于,王虎成. 2018

[15]一种提取小型昆虫总RNA的有效方法. 邓顺,张友军,褚栋. 2007

[16]mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证. 刘俊仙,王丛丛,贺梁琼,韩柱强,蒋菁,钟瑞春,李忠,唐秀梅. 2013

[17]外来入侵植物紫茎泽兰不同组织RNA提取方法. 程红梅,郭建英,高必达,万方浩. 2007

[18]改良TRIZOL法提取真菌RNA的方法. 杨楠,徐正进,周永力. 2008

[19]不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用研究. 孙芳,安泽伟,王其同,李玉婷,华玉伟,黄华孙. 2012

[20]花生子叶RNA提取方法比较与分析. 杨晨,徐凤花,单世华,刘宇,李春娟. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序