共表达基因Ⅱ型新城疫病毒F、HN蛋白mcDNA载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王成宇

作者： 王成宇;姚心茹;刘晶;胡译文;赵维静;姜延龙;王春凤

作者机构：

关键词： 新城疫病毒;融合PCR;mcDNA;F、HN蛋白;共表达;转染

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2018 年 23 期

页码： 1-5

收录情况： 北大核心

摘要： 为了构建共表达基因Ⅱ型新城疫病毒(NDV)F、HN蛋白的mcDNA载体,试验采用融合PCR技术将合成的Ⅱ型NDV的F基因片段与HN基因片段融合并携带Flag标签,构建pUC-F-HN-Flag基因片段,然后与mcDNA载体MN512A连接构建重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag,采用菌落PCR扩增与酶切方法对重组质粒进行鉴定;利用阿拉伯糖诱导剂诱导重组质粒产生mcDNA;将重组质粒转染至HEK-293T细胞中,收集细胞总蛋白并通过Western-blot与间接免疫荧光试验检测蛋白表达情况。结果表明:通过F、HN基因片段的扩增与融合成功构建pUC-F-HN-Flag基因片段,菌落PCR扩增与酶切结果证明重组质粒连接成功,经诱导剂诱导重组质粒成功产生mcDNA,Western-blot及间接免疫荧光试验均检测到目的蛋白。说明重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag构建成功。

分类号： S852.65

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