绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立

文献类型: 中文期刊

第一作者: 蒙亚琦

作者: 蒙亚琦;姚旭东;任秀美奥;郭延华;唐红;张译元;王立民;周平

作者机构:

关键词: 绵羊;成纤维细胞生长因子5(FGF5);单碱基编辑

期刊名称: 中国畜牧兽医

ISSN: 1671-7236

年卷期: 2021 年 010 期

页码: 3533-3544

收录情况: 北大核心

摘要: 研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸链(sgRNA-T1~sgRNA-T4),构建4组不同的重组表达载体;将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞,随后用CruiserTM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示,sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被CruiserTM酶酶切,且测序结果表明都具有靶向效果,编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中,并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率,结果显示,胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max(ng/μL)∶sgRNA(ng/μL)=100∶50,从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示,引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子,通过在成纤维细胞转染表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA(T1、T4);通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎,成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变,为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。

分类号: S826

  • 相关文献

[1]CRISPR/Cpf1单碱基编辑系统的构建及应用. 李树磊,徐妙云,郑红艳,王磊. 2021

[2]碱基编辑技术在猪遗传改良中的应用研究进展. 赵无迪,黄国斌,朱向星,毕延震,唐冬生. 2023

[3]单碱基编辑技术的应用研究进展. 徐茜,杨莎,郝海生,杜卫华,庞云渭,赵善江,邹惠影,朱化彬,李树静,余文莉,赵学明. 2021

[4]猪CD163基因的单碱基编辑研究. 赵为民,王慧利,曹少先,郭日红,王泽平,陈哲,徐奎,付言峰,李碧侠,任守文,程金花. 2022

[5]利用单碱基编辑器定点突变猪肌肉生长抑制素基因的研究. 王晶,朱喆,张鹏,毕延震. 2022

[6]利用单碱基编辑系统定点编辑哈萨克羊MSTN基因的研究. 姚旭东,蒙亚琦,任秀美奥,郭延华,唐红,张译元,王立民,周平. 2021

[7]三氧化二铬可控释放胶囊(Cr-CRD)在绵羊体内每日释放量的测定. 冯宗慈,王洪荣,卢德勒,李玉荣,任家琨,李辉,张富,王庆基,李恒荣. 1997

[8]醉马草饲喂试验研究. 贾纳提,萨赫都拉·霍曼,努尔兰. 1998

[9]影响三氧化二铬在绵羊粪中回收率的因素. 冯宗慈,奥德,张殿荣,赵国福,王秀,尹殿明. 1997

[10]舍饲绵羊的主要行为特征. 李蕴华,巴图,钱宏光. 2003

[11]准噶尔盆地南缘区域羊鼻蝇的发生世代调查. 薄新文,陈志蓉,郑经鸿,徐雪平,张兴亚. 1999

[12]不同阴阳离子水平日粮对绵羊血液部分参数的影响. 胡明,卢德勋,牛文艺,任晓萍,娜仁,参木有. 2002

[13]蛋氨酸锌对绵羊瘤胃发酵和免疫力的影响. 邵凯,卢德勋,冯宗慈. 2000

[14]新疆垦区绵羊瘁螨病流行现状与分析. 陈志蓉. 2008

[15]饼类饲料热喷处理对羊瘤胃生态环境指标的影响. 王学荣,卢德勋,贺健. 1997

[16]新疆垦区绵羊痒螨病流行现状与分析. 陈志蓉. 2008

[17]秸秆生物处理技术研究(五)———尼龙袋法测定粗饲料养分瘤胃48h的消失率. 李杰,李秋玫,王立群,刘忠源. 2000

[18]绵羊毛圆科线虫卵在不同温度下的发育情况观察. 刘继荣,薄新文,王平福,邹丰才. 2004

[19]糊化淀粉和缓释尿素产品对营养物质消化部位的影响. 高民,卢德勋,冯宗慈,奥德,王洪荣,杜敏,珊丹,张海鹰. 1997

[20]不同阴阳离子水平日粮对绵羊瘤胃内环境参数的影响. 胡明,卢德勋,牛文艺,任晓萍,娜仁,参木有,徐桂梅. 2002

作者其他论文 更多>>