适体SELEX筛选中单链DNA的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王丽

作者： 王丽;贺江;王耘;雷兆静;屠康;刘贤进

作者机构：

关键词： 适体;SELEX;双链DNA;单链DNA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2011 年 27 卷 05 期

页码： 1133-1136

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定。结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA。表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成。

分类号： Q503

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