牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄晓静

作者： 黄晓静;李睿;马红芳;冯丽丽;乔松林;邓瑞广;张改平

作者机构：

关键词： 牛IgG2 Fc受体;蛋白表达;蛋白结晶

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2019 年 08 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%Tacsimate~(TM)(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。

分类号： S852.4

  • 相关文献

[1]蛋白激发子Hrip1结构解析及其互作蛋白的研究. 邱德文,张蕾,黄小琴,刘勇. 2014

[2]大豆花叶病毒东北3号株系NIb蛋白表达、纯化及单克隆抗体制备. 张淋淋,李小宇,张春雨,尤晴,张正坤. 2016

[3]发酵条件对细菌工程菌产WSSV-VP37的影响. 张秀丽,杨啸,刘庆慧,马璀艳,黄倢. 2009

[4]膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备. 高旭东,王永志,时圣凤,李忠鹏,李小宇,徐文静,张正坤,路扬,张佳诗. 2013

[5]CP4-EPSPS夹心ELISA配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析. 李忠鹏,于寒松,胡耀辉,时圣凤,刘蕴慧,段永杰,李小宇,王永志,李启云. 2013

[6]性成熟雌性牙鲆(Paralichthys olivaceus)新型膜孕激素受体(mPRL)的定性定量表达分析. 史宝,柳学周,徐涛,李晓妮,徐永江,张金勇. 2017

[7]水稻新生多肽结合复合体α链基因家族的表达分析. 王晓静,孙林静,马忠友,孙癑,李军玲,张融雪,闫双勇,孙卫宁. 2016

[8]半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)新型膜孕激素受体基因(mPRL)在卵母细胞成熟过程中的表达特征. 史宝,柳学周,徐涛,李晓妮,徐永江,张金勇. 2017

[9]飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析. 宋慧芳,李应龙,马恩波,张建珍. 2016

[10]半滑舌鳎Dmrt1蛋白表达、纯化及功能. 胡乔木,王凯琳,陈松林. 2013

[11]牛源ISG15蛋白的原核表达及抗血清的制备. 陶洁,廖金虎,张倩,张信军,朱国强. 2015

[12]胰淀素对小鼠脑内类固醇合成急性调节蛋白表达的影响. 曹晓娟,李强,范奎奎,潘登,刘昊东,王昆,海日汗,杜晨光. 2019

[13]柑橘黄龙病菌与柑橘根系关系研究进展. 雷梦英,杨贤智,黄少彬. 2018

[14]中国水仙NtCCHC锌指蛋白基因的克隆与原核表达. 邹晖,李海明,王伟英,林江波. 2019

[15]人工表达β_2肾上腺素受体的β激动剂多残留检测. 胡梦华,王晶,余秋颖,张浩,樊剑鸣,王方雨. 2018

[16]HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得. 王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲,闫双勇,苏京平. 2019

[17]玉米光敏色素A1基因(ZmPHYA1)在棉花中的转化及分子鉴定. 马燕斌,王霞,李换丽,王平,张建诚,文晋,王新胜,宋梅芳,吴霞,杨建平. 2021

[18]梅花鹿鹿茸S100A4融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化. 刘东,邢秀梅,赵海平,褚文辉,鲁晓萍,王大涛,李春义. 2011

[19]双生病毒在生物技术中的应用. 杨秀玲,丁波,周雪平. 2016

[20]米曲霉谷氨酰胺合成酶基因(AoglnAI)在大肠杆菌中的表达和酶学特性研究. 杨君,王航,薛微,赵伟,田永生,彭日荷,姚泉洪. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序