质粒pUC19-CM-D的构建及应用(摘要)(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卢福芝

作者： 孙靓;黄靖华;黄艳燕;黄日波

作者机构：

关键词： 自杀质粒;乳杆菌;基因敲除

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2010 年 05 期

页码： 31-33

摘要： [目的]用克隆载体pUC19构建乳杆菌自杀质粒及乳杆菌基因缺失工程菌。[方法]以鼠李糖乳杆菌为研究对象,在质粒pUC19的多克隆位点插入氯霉素抗性基因构建pUC19-CM载体;在pUC19-CM载体氯霉素抗性基因的两侧均添加1个用于同源重组的同源臂,再构建成自杀质粒pUC19-CM-D。将自杀质粒pUC19-CM-D转化乳杆菌进行抗性筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。[结果]通过改造pUC19质粒,获得了可应用于构建鼠李糖乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因缺陷型菌株的自杀质粒pUC19-CM-D。运用抗性基因替换方法来构建基因缺陷型菌株,在一定程度上避免了质粒整合带来的问题,同时提供了一个筛选标记,能够通过一次筛选即可得到缺陷型菌株。这种自杀质粒的改造和基因缺陷型菌株的构建方法具有通用性,可以应用于其他的载体和菌株。[结论]pUC19-CM-D质粒的构建及应用为乳杆菌基因缺失工程菌的构建提供了1个快速有效的手段,也为乳杆菌基因功能研究奠定了基础。

分类号： Q78

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