山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)HRM检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张靖鹏

作者： 张靖鹏;江锦秀;林裕胜;游伟;刘道泉;毛坤明;江斌;胡奇林

作者机构：

关键词： 山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2);高分辨率熔解曲线(HRM);检测方法

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2022 年 30 卷 012 期

页码： 2456-2463

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 对于山羊(Capra hircus)地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus 2,ENTV-2)引起的羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor,ENT),目前已建立了RT-PCR结合限制性内切酶鉴定ENTV的方法以及RT-PCR和qPCR等检测方法,但是内源性逆转录病毒(endogenous retrovirus,ERVs)的存在可干扰结果的准确性.本研究通过生物信息学方法将ENTV-2与ERVs和绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)进行比对,寻找ENTV-2囊膜蛋白(envelope protein,env)基因的保守序列并设计1对特异性引物,通过优化反应条件而建立高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve,HRM)检测方法.优化结果显示,最佳反应体系为:上下游引物各0.4μmol/L,模板1μL,styo9(2.5μmol/L)1μL,2×Premix Taq 10μL,补充ddH2O至终体积20μL;反应条件为:94℃2 min;94℃15 s,59℃15 s,72℃15 s,40个循环;之后进行熔解曲线分析.构建env基因重组阳性质粒作为标准品,对HRM方法的特异性、敏感性和重复性进行检测.结果显示,所建立的HRM方法的特异性强,与ENTV-2高度同源的ERVs无交叉反应;敏感性高,对env基因重组阳性质粒的最低检测限为82.7拷贝/μL;重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均<1%.对92份临床样品的阳性检出率为18.7%,与TaqMan检测方法的符合率为100%.本研究可为山羊地方性鼻内肿瘤病毒病的早期、快速检测提供技术支持.

分类号： S852.62

  • 相关文献

[1]山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-2FJ株的分离纯化和全基因组序列分析. 江锦秀,林裕胜,张靖鹏,游伟,黄丽丽,毛坤明,胡奇林. 2020

[2]三种检测内源性基因修饰方法比较. 李炜杰,杨娇,何高明,王立民,皮文辉,周平. 2016

[3]基于转录组测序的ITGAD基因InDel位点鉴定及其与山羊生长性状的关联性分析. 吴贤锋,王金宝,刘远,池春梅,黄勤楼,李文杨. 2022

[4]基于PCR-HRM的水稻氮高效基因NRT1.1B功能标记开发及应用. 房文文,王海凤,郭涛,薛芳,姜艳芳,张焕霞,张士永. 2023

[5]马铃薯X病毒研究进展. 陈虞超,聂峰杰,张丽,巩檑,甘晓燕,石磊,宋玉霞. 2016

[6]紫苏叶中甲胺磷的残留检测方法. 赵云,秦信蓉,赵利晖,熊方宇. 2015

[7]清镇市某奶牛场牛结核的检测与净化. 吴位珩,宋大书,田孟林,杨莉,杨茂生,孙启跃,徐景峨. 2014

[8]茶叶咖啡碱检测方法-紫外分光光度法的改进与探讨. 刘晓霞,周国兰,何萍,郑文丽,赵华富. 2010

[9]浅谈土壤常规检测中的几个关键环节. 林媚. 2017

[10]牛病毒性腹泻流行现状的研究. 姜玲玲,周思旋,史开志,徐洪忠. 2014

[11]鸡T淋巴细胞功能的检测方法研究进展. 刘胜旺. 2000

[12]新农药米满、锐劲特在甘监上的残留试验. 段婷婷,陈才俊,秦立新,廖国会,陈湘燕. 2006

[13]稻茬免耕油菜除草剂在土壤中的消解动态. 段婷婷,魏进,叶照春,何永福. 2013

[14]氨基糖苷类药物的危害及其检测方法研究进展. 高月,王耀,胡骁飞,邓瑞广,侯玉泽. 2016

[15]马铃薯黑痣病多重实时定量PCR检测方法的建立. 陈恩发,卢扬,彭慧元,雷尊国,邓宽平. 2014

[16]DP-305423转基因大豆PCR检测方法研究. 吕智超,李飞武,周宁,闫伟,王丕武,张明. 2011

[17]HPLC-VWD法测定猪粪中喹乙醇的残留. 李维,王冉,魏瑞成,张宁,王恬. 2009

[18]进口大豆中菜豆晕疫病菌巢式PCR检测方法的建立. 杨万风,刘艳,刘翔,邵沛泽,谌运清,赵文军. 2015

[19]黄曲霉毒素B1检测方法的分析. 叶雪珠,王小骊,赵燕申,董秀金. 2003

[20]食品中二氧化硫的来源与检测方法. 尹洁,朱军莉,励建荣. 2009

作者其他论文 更多>>

微信小程序