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PCV-2分离新方法的建立及广东株全基因序列的分析

文献类型： 中文期刊

作者： 赵炳武 1 ; 于海霞 2 ; 郝永清 1 ; 蒋智勇 3 ; 宋长绪 3 ;

作者机构： 1.内蒙古农业大学动物科学与医学学院

2.高明出入境检验检疫局

3.广东省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪圆环病毒2型;分离;基因组

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2008 年 29 卷 04 期

页码： 12-17

收录情况： 北大核心

摘要： 利用体外环化的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因的感染性,建立一种分离PCV-2的方法。根据GenBank中PCV-2的基因序列,设计合成1对扩增PCV-2全基因组的特异性引物。通过PCR方法从广东发病猪病料扩增到PCV-2全基因组片段,将该片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得阳性重组质粒pM-DT-YF并测序。将所测序列与GenBank中发表的PCV毒株序列进行同源性比较。将质粒pMDT-YF大量扩增,经SacⅡ酶切质粒得到PCV-2全基因组,通过T4连接酶体外环化后,脂质体介导转染PK-15细胞,盲传8代。用间接免疫荧光抗体试验(IFA)可检测到特异性荧光。将转染细胞稀释后接96孔细胞培养板,培养3 d。用荧光定量法检测各孔的PCV-2拷贝数,选择拷贝数最大的细胞扩大培养,经IFA法测定病毒滴度显著增加。结果表明,利用具有感染性的体外环化的全基因组的克隆转染PK-15细胞,并通过选择压力可获得较高滴度的具有感染性的PCV-2。

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