文献类型： 中文期刊

作者： 孙伟伟 ¹ ; 钱晶 ² ; 王晶宇 ² ; 欧阳伟 ² ; 夏兴霞 ² ; 王晓丽 ² ; 诸玉梅 ² ; 马孙婷 ² ; 王永山 ² ; 徐业芬 ³ ;

作者机构： 1.西藏农牧学院动物科学学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室

2.江苏省农业科学院兽医研究所

3.西藏农牧学院动物科学学院

关键词： 犬瘟热病毒;H蛋白;单克隆抗体;抗病毒活性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 011 期

页码： 1383-1389

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备犬瘟热病毒(CDV)H蛋白单克隆抗体,采用蔗糖密度梯度离心法提纯CDV-Ondetstepoort株,利用RT-PCR方法扩增其H基因截短片段(H1、H2、H3),克隆至pET-28a (+)载体并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化3种截短H蛋白;以纯化病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA、间接免疫荧光法(IFA)和病毒中和试验分析杂交瘤细胞的生物学特性.结果表明,纯化的截短H蛋白表达正确,以此筛选到7株能稳定分泌犬瘟热病毒和重组H2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2),抗体亚类鉴定均为Ig G1κ;IFA检测均为阳性,表明7种单克隆抗体特异性好;病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为24~28,诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为1*102~1*106;间接ELISA叠加试验显示,3B5、4G12、5A6、7B2之间的叠加系数均在50%以上,表明这4种单克隆抗体识别不同抗原表位;另外,3B5、4G12、5A6、7B2还能中和当前流行的Asia 1型CDV毒株,具有较好的广谱中和活性.本研究为后续CDV感染的免疫治疗和CDV检测方法的建立提供了材料基础.