文献类型： 中文期刊

作者： 周兵 ¹ ; 李天鹤 ² ; 李宁 ³ ; 徐黎明 ⁴ ; 郭茉 ¹ ; 马蕾 ¹ ; 张瑛杰 ¹ ; 叶贤龙 ¹ ; 赵景壮 ⁴ ;

作者机构： 1.东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室

2.中国科学院大学生命科学学院

3.国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心

4.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： IBDV;细菌展示;单链抗体;中和活性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2014 年 36 卷 03 期

页码： 227-231

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的细菌展示单链抗体(scFv)库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有(Gly4Ser)3linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv,其氨基酸同源性为82.16%~87.27%。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达,该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外,利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体,检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明,仅有一株scFv具有病毒中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DF1)的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。