文献类型： 中文期刊

作者： 胡谋 ¹ ; 黄雷 ¹ ; 姚嘉赟 ¹ ; 徐洋 ¹ ; 蔺凌云 ¹ ; 沈锦玉 ¹ ; 许式见 ² ; 潘晓艺 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室

2.农业农村部鲟鱼遗传育种重点实验室杭州千岛湖鲟龙科技股份有限公司

关键词： 杂交鲟;停乳链球菌;细菌鉴定;灭活疫苗;免疫作用

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 010 期

页码： 1072-1079

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究杂交鲟“红嘴病”的病原，本研究对自然患“红嘴病”杂交鲟的肾脏、肝脏进行病原菌的分离，对分离株经形态学观察、生化特性鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析，并将分离菌以1.0×10～7cfu/mL～1.0×10～3cfu/mL的剂量感染健康杂交鲟，每日观察并记录鲟鱼的活力和死亡数，感染后10 d对各组发病鱼剖检并再次分离病原菌。采用SPSS 19.0的概率单位图解法计算该分离菌对杂交鲟的半数致死量(LD₅₀)。结果显示，从患病杂交鲟肾脏中分离到一株优势革兰氏阳性菌株KS2，呈卵圆形或圆形，成双或成链状排列。生化鉴定结果显示，分离株KS2与停乳链球菌停乳亚种的生化特征一致；PCR结果显示，从分离菌中扩增到约1 500 bp的16S r RNA基因片段，其与停乳链球菌停乳亚种16S rRNA基因的同源性达100%，二者在进化树中聚为一支。以上结果表明从杂交鲟中分离到一株停乳链球菌停乳亚种KS2株。感染试验结果显示，感染组发病鲟鱼均出现嘴部充血肿胀、肛门红肿等“红嘴病”典型症状，并从濒死鲟鱼肾脏中分离的细菌与原感染菌的形态、生化特征均一致；经计算分离菌株KS2对杂交鲟的LD₅₀为3.83×10～4cfu/mL。结合上述结果判定菌株KS2为杂交鲟发病的病原菌。利用0.5%甲醛制备KS2菌株灭活疫苗，经安全性检验合格后将其以两种剂量（灭活前分别为1.0×10～8cfu/mL及1.0×10～7cfu/mL的菌液）免疫杂交鲟，分别于免疫后不同时间采血，采用试剂盒测定各组鲟鱼血清中C3补体和免疫球蛋白IgM的含量，免疫后90 d每组鱼分别经腹腔注射0.5 mL（1.0×10～7cfu/mL）停乳链球菌攻毒，通过观察记录10 d内鲟鱼的发病和死亡情况，计算疫苗的相对保护率（RPS），评估该疫苗在实验室阶段对鲟鱼的免疫保护效果。在田间试验中利用该灭活疫苗（1.0×10～8cfu/mL）免疫58 637尾杂交鲟，另将66 544尾鲟鱼作为空白对照组，统计患“红嘴病”死亡鲟鱼的数量，评估该疫苗在田间试验阶段对鲟鱼的免疫保护效果。实验室免疫保护试验结果显示，免疫后60 d和90 d，免疫组鲟鱼血清中C3补体和IgM的含量均显著高于PBS对照组（P<0.05），且免疫后30 d～90 d，高剂量免疫组鲟鱼血清中上述两个指标的含量均随时间的延长而升高。攻毒结果显示：高、低剂量灭活疫苗免疫组和对照组杂交鲟的RPS分别为75%、50%。灭活疫苗田间试验结果显示，免疫组杂交鲟因“红嘴病”死亡鲟鱼1 295尾，明显低于对照组死亡的3 799尾，死亡率降低了3.5%。综上所述，本研究证实停乳链球菌停乳亚种是杂交鲟“红嘴病”的病原，对杂交鲟的致病性较强。首次制备鲟鱼源停乳链球菌灭活疫苗，通过实验室免疫保护试验和田间免疫试验证明该疫苗的免疫原性较强，能够刺激鲟鱼产生较强的体液免疫反应，对鲟鱼的免疫保护效果较好，具有很好的应用前景。本研究为鲟鱼“红嘴病”疫苗的研制提供了重要参考依据，对该病的防治具有重要意义。