文献类型： 中文期刊

作者： 罗晓雯 ¹ ; 沈锦玉 ² ; 阳涛 ³ ; 曾令兵 ¹ ; 周勇 ¹ ; 范玉顶 ¹ ; 刘文枝 ¹ ; 李逸群 ¹ ; 薛明洋 ¹ ; 孟彦 ¹ ; 江南 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所

2.浙江省淡水水产研究所

3.通威股份动物保健研究所

关键词： 大口黑鲈;蛙病毒;细胞培养;病毒分离鉴定;

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2022 年 003 期

页码： 494-502

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用电子显微镜观察和细胞培养等技术,从湖北黄陂某养殖场患病大口黑鲈（Micropterus salmoides）体内发现并分离到一株蛙病毒。患病大口黑鲈的临床症状主要表现为体表出血、溃疡,肝脏发白。将病鱼内脏组织匀浆超微滤液接种鳜脑细胞系（mandarin fish brain,MFB）细胞能产生典型细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,病毒滴度达到10^8.36±0.15 TCID₅₀/m L。细胞培养病毒的超薄切片电镜观察结果显示,细胞质中存在大量直径约为150 nm左右的正六边形病毒粒子,呈晶格排列。细胞培养病毒的人工感染大口黑鲈试验结果显示,7 d内试验鱼死亡率高达100%,其临床症状与自然发病鱼相似。采用大口黑鲈病毒（largemouth bass virus,LMBV）的特异性PCR检测方法对患病鲈组织样品和细胞培养病毒样品进行检测,均能扩增出241 bp的单一目的条带。进一步根据Gen Bank中LMBV主衣壳蛋白（major capsid protein,MCP）基因序列设计特异性引物,均能从上述样品中扩增出1392 bp的MCP基因开放阅读框（open reading frame,ORF）全长。将MCP氨基酸全序列进行比对,结果显示其与Santee-Cooper蛙病毒、孔雀鱼病毒6型及大口黑鲈溃疡综合征病毒的MCP氨基酸序列同源性高达100%。系统进化结果显示,与感染鱼类的虹彩病毒科蛙病毒属病毒,如鳜鱼蛙病毒、Santee-Cooper蛙病毒、孔雀鱼病毒6型和大口黑鲈溃疡综合征病毒等聚成一支。这些结果证明,该分离株为虹彩病毒科蛙病毒属的成员,暂命名为大口黑鲈蛙病毒（largemouth bass ranavirus,LMBRa V）湖北株LMBRa V-HB001。病毒敏感细胞系筛选试验结果表明,病毒LMBRa V-HB001感染鲤上皮瘤细胞（epithelioma papulosum cyprinid,EPC）、草鱼性腺细胞（grass carp ovary,GCO）、大鲵肌肉细胞（giant salamander muscle,GSM）和鲫脑组织细胞（gibel carp brain,Gi CB）均能产生典型CPE,病毒滴度可达10^8.0 TCID₅₀/m L以上。本研究首次在湖北省养殖大口黑鲈体内分离与鉴定了LMBRa V病毒,建立了病毒的细胞培养方法,为进一步研究该病毒的传播、诊断和防控技术提供了重要参考。