文献类型： 中文期刊

作者： 徐重新 ¹ ; 张霄 ² ; 刘媛 ³ ; 王耘 ⁴ ; 张存政 ⁵ ; 刘贤进 ⁶ ;

作者机构： 1.南京师范大学生命科学学院

2.江苏省微生物与功能基因组学重点实验室

3.江苏省食品质量安全重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室

4.江苏省食品质量安全重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地

5.农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室

6.南京农业大学植物保护学院

关键词： 噬菌体抗体库;Cry1B毒蛋白质;单链抗体;ELISA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 04 期

页码： 202-206

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用人源化噬菌体抗体库筛选抗Bt Cry1B毒蛋白质的单链抗体(Single-chain antibodies,scFv)。将扩增后的噬菌体抗体库与固相化包被的Cry1B毒蛋白质特异性结合,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特异性识别Cry1B毒蛋白质的噬菌体单链抗体。从最后一轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,对阳性克隆进行PCR扩增、DNA电泳鉴定及测序,成功筛选获得8个阳性噬菌体scFvs,经鉴定均有完整外源基因片段插入。挑取阳性值最高的scFv(1E2)建立了基于单链抗体的Cry1B毒蛋白质间接竞争ELISA检测方法。结果表明,Cry1B毒蛋白质对噬菌体scFv(1E2)的抑制中浓度(IC50)为1.075μg/ml,最低检测限(IC10)为0.013 4μg/ml,线性检测范围在0.5μg/ml至4.0μg/ml之间。