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基于抗原-抗体共表达的细菌展示技术的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 徐黎明 1 ; 郭茉 2 ; 任桂萍 2 ; 尹杰超 2 ; 李德山 2 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.东北农业大学生命科学学院

关键词： 周质空间;抗原抗体共表达;流式细胞仪筛选;抗体库筛选;蛋白相互作用

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2013 年 29 卷 004 期

页码： 396-399

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的建立细菌周质内抗原抗体共表达系统.方法将人白介素-1β(hIL-1β)基因和抗人白介素1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)基因分别插入到细菌展示载体pBFD的pelB前导肽(游离型前导肽)和NlpA前导肽(锚定型前导肽)下游构建出重组载体pBFD-Ab-Ag.将pBFD-Ab-Ag转入到E.coli DH5α中诱导表达,抗原和抗体蛋白相互结合而被锚定到细菌内膜外侧,破除细菌外壁(原生质球制备)后与适当浓度的FITC标记的小鼠抗hIL-1β抗体进行孵育,最后经流式细胞仪检测荧光信号,根据荧光信号强弱分析抗原抗体表达和相互作用情况.结果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很强的荧光信号,阳性率获得了大大的提高.结论成功建立了建立细菌周质内抗原抗体共表达系统,实现了抗体和抗原细菌周质内的正确折叠和相互识别.简化了现有的抗体筛选的流程,为蛋白质相互作用的研究提供了新的技术手段.

  • 相关文献

[1]基于流式细胞术的scFv抗体库筛选技术的建立. 徐黎明,任桂萍,尹杰超,田辉,李德山. 2013

[2]大菱鲆(Scophthalmus maximus)热休克蛋白SmHsp47相互作用蛋白His-pull down和质谱鉴定. 朱春月,孙志宾,马爱军,刘志峰,杨敬昆,赵亭亭. 2021

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