文献类型： 中文期刊
作者： 吴东 1 ; 倪艳秀 1 ; 何孔旺 1 ; 李郁 1 ;
作者机构： 1.安徽农业大学动物科技学院;江苏省农业科学院兽医研究所
关键词： 猪胸膜肺炎放线杆菌;ApxⅡ主要抗原表位;原核表达;蛋白纯化;ELISA
期刊名称： Agricultural Science & Technology
ISSN： 1009-4229
年卷期： 2014 年 01 期
页码： 13-16+38
摘要： [目的]以原核表达的重组蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测猪血清中APP抗体。[方法]将猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ主要抗原表位区基因片段克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pETApxⅡA1。将重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中进行表达。通过Western-blot分析重组蛋白免疫原性。用纯化的重组蛋白作为包被抗原建立检测猪APP抗体的间接ELISA方法,并优化反应条件,确定抗原的最佳包被量和血清的最佳稀释度。[结果]经PCR双酶切及测序鉴定,重组质粒构建成功,诱导表达纯化后,重组蛋白可被APP阳性血清特异性的识别,表明表达产物具有良好的免疫原性。用纯化的重组蛋白初步建立了检测APP抗体的间接ELISA方法,用该方法与商品化ApxⅣ抗体检测试剂盒分别对94份临床非免疫血清样品进行检测,结果两者的符合率为90.4%。[结论]所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为流行病学调查和疫苗免疫效果评估提供了技术手段。
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