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鳗鲡疱疹病毒ORF8基因的克隆表达及转录时相分析

文献类型： 中文期刊

作者： 陈曦 1 ; 李英英 1 ; 陈强 1 ; 宋铁英 1 ; 葛均青 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词： 鳗鲡疱疹病毒;ORF8基因;转录时相;克隆;原核表达

期刊名称： 大连海洋大学学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 001 期

页码： 10-15

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus,AngHV）ORF8基因的特性,根据GenBank中AngHV参考株（NC013668）的ORF8序列设计引物,采取PCR方法从分离的AngHV福建病毒株（AngHV-FJ）基因组中扩增出特异性片段,克隆至pMD19-T载体,经酶切和测序验证,获得了ORF8的基因序列。结果表明:经生物信息学分析,ORF8编码的蛋白稳定性较好,存在跨膜结构且抗原表位多,符合病毒囊膜蛋白的特征;经转录时相分析,ORF8是病毒的早期基因（early gene, E）,可能在病毒感染的早期阶段就发挥作用;将ORF8克隆至表达载体pET-32a,转化入大肠杆菌E.coli BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE及Western blot检验,实现了ORF8在大肠杆菌中的高效表达,进一步通过割胶的方法获得了相对分子质量约为44 000的高纯度融合表达蛋白。本研究为下一步评价该表达蛋白的免疫效果和制备抗体,以及开发免疫诊断试剂和疫苗提供了研究基础。

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