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苦瓜McPDS基因克隆及CRISPR/Cas9基因编辑载体构建

文献类型： 中文期刊

作者： 韩鑫 1 ; 郭金菊 1 ; 张惠尧 1 ; 吴廷全 1 ; 张长远 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院设施农业研究所;华中农业大学园艺林学学院

关键词： 苦瓜;McPDS;基因克隆;载体构建;基因编辑

期刊名称： 中国瓜菜

ISSN： 1673-2871

年卷期： 2024 年 37 卷 003 期

页码： 20-27

收录情况： 北大核心

摘要： 以苦瓜八氢番茄红素脱氢酶(phytoene dehydrogenase,PDS)基因为靶标,构建其特异gRNA的CRISPR/Cas9 基因编辑载体,以期为建立苦瓜CRISPR/Cas9 基因编辑技术体系奠定基础.以苦瓜自交系B07 叶片cDNA为模板,同源克隆苦瓜McPDS基因CDS序列.结果表明,McPDS基因CDS序列全长 1731 bp,编码 576 个氨基酸,蛋白质相对分子质量为 64.44 kD,理论等电点(PI)为 7.09.跨膜结构分析结果表明,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白.系统进化树分析结果表明,McPDS与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物中的PDS蛋白同源性较高.此外,以McPDS为靶标基因,在 5'端筛选 2 个高特异性靶点,经设计引物,成功构建 1 个双靶点CRISPR/Cas9 基因编辑载体,为苦瓜基因编辑体系的建立奠定了技术基础.

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