文献类型： 中文期刊

作者： 李超 ¹ ; 陈明 ² ; 黄维义 ¹ ; 王瑞 ² ; 余晓丽 ² ; 黄婷 ² ; 雷爱莹 ² ; 梁万文 ² ;

作者机构： 1.广西大学动物科学技术学院

2.广西水产研究所

关键词： 尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus);外周血白细胞;总RNA;mRNA;冻干浓缩

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2010 年 40 卷 02 期

页码： 19-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用Trizol一步法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)外周血白细胞总RNA提取方法进行优化,通过β-ac-tin基因反转录对所分离到的总RNA进行质量验证,并对mRNA的冻干浓缩进行了探讨,确定了一套快速、高效的尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA分离和mRNA浓缩体系。结果显示:获得的总RNA纯度较高,OD260/OD280均在1.9~2.0之间;甲醛变性电泳显示,总RNA完整性良好,28S与18S比值为2∶1;总RNA的分离量与起始白细胞量成正比,每毫升Trizol最大裂解量为1×108个白细胞,可得到总RNA量约为90μg;总RNA的分离量在前四个小时随着沉淀时间的增长而增加,并成功进行了β-actin基因的反转录。mRNA的分离率为1.08%,通过冻干浓缩成功使其浓度提高9倍。结果表明:分离到的总RNA质量可充分满足下游分子生物学实验要求,所建立的mRNA浓缩方法简单易行,可完全解决mRNA起始浓度低的难题。