文献类型： 中文期刊

作者： 林婧楠 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 刘淼 ¹ ; 任广明 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ; 徐黎明 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 鲤春病毒血症病毒;糖蛋白;酵母表面展示系统;流式细胞仪

期刊名称： 水生生物学报

ISSN： 1000-3207

年卷期： 2019 年 43 卷 005 期

页码： 977-982

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 糖蛋白(Glycoprotein,G)作为鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)主要的抗原蛋白,已成为现阶段SVCV病毒检测、抗体制备以及疫苗研制的热点.为了对其进行酵母表面展示,研究以SVCV-shlj1分离株基因组为模板,通过RT-PCR技术,体外扩增获得SVCV表面糖蛋白的基因开放阅读框(1530 bp)片段,将其克隆至酵母表面展示载体pYD1,构建重组质粒pYD1-G.利用电转化方法将重组质粒pYD1-G导入酿酒酵母EBY100感受态细胞,经YNB选择培养基筛选和菌液PCR的鉴定,挑选出阳性转化子(命名为EBY100-pYD1-G),对其进行2%半乳糖诱导.利用细胞免疫荧光和流式细胞仪检测G蛋白的酵母表面展示情况.细胞免疫荧光结果显示,诱导后的酵母细胞EBY100-pYD1-G能产生特异性红色荧光,且随着诱导时间的增加,红色荧光的酵母细胞所占比例不断增加,各组之间差异显著(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示,酵母细胞的荧光强度与诱导时间呈正比,其中诱导48h与72h的酵母细胞荧光强度不存在显著差异,基本趋于稳定不变的状态.因此,选取诱导48h为酵母表面展示的最佳诱导时间.上述研究结果表明SVCV的G蛋白已经成功展示于酿酒酵母细胞表面,研究为鲤春病毒血症酵母口服疫苗的研发奠定了前期基础.