文献类型： 中文期刊

作者： 于建宁 ¹ ; 闫乐艳 ¹ ; 陈哲 ¹ ; 邵西兵 ¹ ; 戴子淳 ¹ ; 应诗家 ¹ ; 施振旦 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室

关键词： 鹅;原始生殖细胞;生殖腺消化结合短期培养法;冷冻保存

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2017 年 29 卷 03 期

页码： 401-407

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立针对鹅原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的分离纯化与冷冻保存方法,对血液Ficoll密度梯度离心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法与生殖腺消化结合体外短时间培养法4种PGCs分离方法以及STEM-CELLBANKER、CELLBANKER 2与10%DMSO加90%血清等3种冻存液进行了比较研究。通过形态学观察、糖原染色与PGCs特异免疫荧光染色鉴定PGCs,同时利用台盼蓝染色检测PGCs活力等方法对其分离和保存效果进行评价。结果表明,从鹅胚血液与生殖腺中均已经成功分离到鹅PGCs;生殖腺消化结合体外短期培养法与传统的血液分离法相比,获得的鹅PGCs数量、纯度与活力最高,每枚胚胎获得的鹅PGCs数量达到115个、细胞纯度达80.8%、细胞活率达88.3%;而商业化的干细胞冷冻保护液STEM-CELLBANKER同一般的体细胞冻存液相比更适合鹅PGCs的冷冻保存,冷冻解冻后的细胞存活率达90%左右。试验可以得出结论:生殖腺消化结合体外短期培养法成功分离到数量与纯度都可观的鹅PGCs,STEM-CELLBANKER冻存液能够用于鹅PGCs的长期冷冻保存。