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丝状支原体山羊亚种SYBR Green ⅠqRT-PCR快速检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 林裕胜 1 ; 江锦秀 1 ; 张靖鹏 1 ; 游伟 1 ; 胡奇林 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 丝状支原体山羊亚种;SYBR GreenⅠ;qRT-PCR;检测方法

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2017 年 11 期

页码： 1895-1902

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)可以引起羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)。现有的方法费时、不能定量,不利于Mmc的准确快速检测。为建立检测Mmc的SYBR Green I qRT-PCR方法,本研究基于Mmc的MLC_1770基因(hypothetical protein gene)序列进行特异性引物设计,用构建的Mmc-1770重组质粒为阳性标准品建立标准曲线,进行了该方法的特异性、灵敏性和重复实验。结果显示:标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率是101.3%;该方法对山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipenumoniae,Mo)、巴氏杆菌(Pasteurell amultocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)及羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)均无交叉反应;最低检测限为226拷贝/μL,比常规PCR高100倍;组内变异系数为0.54%~0.79%,组间变异系数为0.70%~0.96%;对临床95份疑似MPGS样品进行检测,阳性率为11.6%(11/95)。实验结果证明该方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合于临床样品中Mmc的快速准确检测。

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