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构建胸膜肺炎放线杆菌apxIC基因插入突变株

文献类型： 中文期刊

作者： 徐福洲 1 ; 陈小玲 1 ; 史爱华 1 ; 杨兵 1 ; 王金洛 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

关键词： 胸膜肺炎放线杆菌;apxIC基因;突变;同源重组

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2008 年 19 卷 02 期

页码： 229-231

摘要： 目的:构建胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIC基因插入突变菌株,以鉴定ApxⅠ毒素的生物学特性。方法:根据apxI核酸序列(U05042)设计1对引物,用于自APP血清10型参考菌株(D13039)基因组DNA中扩增apxIC基因及其上下游约2.8kb的基因片段,经克隆测序后在apxIC基因下游XhoⅠ酶切位点处插入约0.9kb的氯霉素(Chl)抗性基因表达盒,构建用于转化的转移载体pUIC-Chlr,将转移载体DNA经电转化导入APP血清10型参考菌株中进行同源重组,以获得突变菌株。结果:在含有氯霉素的培养基中经筛选获得2株丧失溶血活性的突变菌株(D13039C-Chlr);利用PCR和Southern blot对突变菌株鉴定,显示氯霉素抗性基因已被插入细菌基因组中。结论:利用电转化和同源重组技术构建成功APPapxIC基因插入突变菌株,为分析ApxⅠ毒素的生物学特性,进而研制APP基因工程减毒活疫苗奠定了基础。

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