文献类型： 中文期刊
作者： 马毅 1 ; 舒建洪 2 ; 李晴; 关宏; 安晓荣; 陈永福;
作者机构： 1.天津市畜牧兽医研究所
2.浙江理工大学生命科学学院
关键词： 绵羊;肌肉抑制素;克隆;原核表达;纯化;多克隆抗体
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2009 年 40 卷 08 期
页码： 1253-1257
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理,进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备。首先将绵羊myostatin基因C-端克隆入含组氨酸标签的表达载体pET-30a-c(+)中,转化大肠杆菌BL21后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化重组蛋白,薄层扫描及Bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量。应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测多克隆抗体效价,用Western blot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性。结果,薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上,Bradford法检测蛋白浓度约5 mg.mL-1,制备的抗血清效价可达1∶250 000以上,Western blot检测证明抗体特异性良好,免疫细胞化学染色表明抗血清可检测到肌肉细胞中内源性myostatin的表达,说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究,有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理。
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