文献类型： 中文期刊

作者： 卢清侠 ¹ ; 王献伟 ¹ ; 马强 ¹ ; 陈俊峰 ¹ ; 高彬文 ¹ ; 邢宝松 ¹ ; 张家庆 ¹ ; 任巧玲 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室

关键词： 葡萄籽原花青素;miR-181a;转化生长因子β受体Ⅰ;颗粒细胞;氧化损伤

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 29-36

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在研究葡萄籽原花青素（grape seed procyanidins, GSP）抑制颗粒细胞氧化损伤的作用及其可能机制。腹腔注射3-硝基丙酸（3-nitropropionic acid, 3-NP）诱导小鼠卵泡氧化损伤，并补充GSP进行干预处理；体外分离培养小鼠卵巢颗粒细胞，通过抑制或过表达miR-181a,研究原花青素B2（grape seed procyanidin B2,GSPB2）通过下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用。采用定量PCR方法检测miR-181a表达水平，应用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyl tetrazolium, MTT）法检测细胞活力，利用免疫组化法检测活化天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved caspase-3）,应用酶标仪法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性，采用双荧光素酶报告基因检测miR-181a和转化生长因子β受体Ⅰ（TGFBR1）的靶向调控关系，使用原位末端标记法（TUNEL）染色检测颗粒细胞凋亡情况，应用Western blot法检测TGFBR1蛋白水平。结果显示：在动物试验中，与对照组相比，3-NP组颗粒细胞活力显著降低（P＜0.05）;同时caspase-3活性、cleaved caspase-3蛋白及miR-181a表达明显升高（P＜0.05）;而GSP干预处理可扭转上述各指标的改变（P＜0.05）。双荧光素酶报告试验结果显示，TGFBR1为miR-181a的靶基因；进一步分析发现，与对照组相比，miR-181a模拟物转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著降低（P＜0.05）,而miR-181a抑制剂转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著升高（P＜0.05）。在细胞试验中，与对照组比较，H₂O₂组细胞中miR-181a表达升高，TGFBR1表达降低（P＜0.05）,细胞活力下降，caspase-3活性和细胞凋亡率均显著升高；而GSPB2预处理可扭转上述各指标的改变（P＜0.05）。综上，GSP可抑制颗粒细胞的氧化损伤，其作用可能是通过抑制miR-181a表达而调控TGFBR1表达实现。