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稳定表达猪CYP3A29基因的PAM细胞系构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 郅西柱 1 ; 方晓敏 2 ; 赵芳 2 ; 周艳红 3 ; 涂枫 2 ;

作者机构： 1.南京农业大学动物科技学院江苏省农业科学院畜牧所

2.江苏省农业科学院畜牧研究所

3.唐山职业技术学院

关键词： 猪;CYP3A29;肺泡巨噬细胞;稳定表达细胞系

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 554-559

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,利用RT-PCR方法获取猪CYP3A29基因序列后与克隆载体PMD18-T相连,得到PMD18-T-CYP3A29重组质粒并测序验证,利用Xho I和Not I双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确性,并以脂质体2000将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/21,经Zeocin抗性筛选,借助RT-PCR及Wesrern-blot鉴定该基因的表达情况。结果表明,成功获得表达CYP3A29的细胞株,且连续培养10代后,RT-PCR及Wesrern-blot仍能检测到该基因表达。说明,稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功,该细胞系的成功构建为进一步研究分析猪CYP3A29基因的功能提供了可能。

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