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真菌嵌合体植酸酶的构建及其抗蛋白酶水解特性研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陈庄 1 ; 贝锦龙 2 ; 廖玲 2 ; 刘世贵 1 ;

作者机构： 1.四川大学生命科学学院

2.广东省农业科学院畜牧研究所

关键词： 植酸酶;烟曲霉;黑曲霉;蛋白酶水解;蛋白质工程

期刊名称： 中山大学学报(自然科学版)

ISSN： 0529-6579

年卷期： 2008 年 47 卷 04 期

页码： 72-76+87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在烟曲霉植酸酶(Afp)的基因上,通过PCR逐步将编码1-47、178-237及338-381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL3135植酸酶(Anp)中的对应片段,构建了3个嵌合体(嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)基因,并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化。所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶。在m(胰蛋白酶)/m(植酸酶)为0.1时,Anp完全失活;但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13%~23%。胰蛋白酶水解产物的SDS-PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解,但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整。嵌合体也具有一些与Anp及Afp相异的新pH曲线及耐热性。实验表明,通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行。

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