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铁皮石斛DoSMT2基因的克隆与表达分析

文献类型： 中文期刊

作者： 林江波 1 ; 王伟英 1 ; 邹晖 1 ; 戴艺民 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院亚热带农业研究所

关键词： 铁皮石斛;甾醇C-24甲基转移酶;原核表达;荧光定量PCR

期刊名称： 热带亚热带植物学报

ISSN： 1005-3395

年卷期： 2020 年 28 卷 006 期

页码： 591-598

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了解SMT2基因在铁皮石斛(Dendrobium officinale)甾醇代谢过程中的作用,利用RACE技术克隆到1个DoSMT2基因,开放阅读框为1089 bp,编码362个氨基酸,DoSMT2相对分子量为40.345 kD,理论等电点为8.13,属于稳定的亲水性蛋白.经BLAST P检索,DoSMT2蛋白属于AdoMet-MTases超级家族,含有4个S-腺苷蛋氨酸结合位点、1个甲基转移酶保守结构域和1个甾醇甲基转移酶C末端保守结构域.系统进化分析表明,DoSMT2与深圳拟兰(Apostasia shenzhenica)的SMT2亲缘关系最近,确定其属于SMT2家族.qRT-PCR分析结果表明,DoSMT2基因在茎和叶都能表达,10月份的表达量最高,叶片的表达量显著高于茎,推断叶片的甾醇代谢比茎活跃.构建了pET-29a-DoSMT2原核表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达出预期大小的蛋白.这为铁皮石斛DoSMT2的甲基化机制及甾醇化合物代谢研究奠定基础.

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