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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪脂蛋白酯酶mRNA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 廉红霞 1 ; 卢德勋 2 ; 高民 2 ;

作者机构： 1.内蒙古农业大学动物科学与医学学院

2.内蒙古农牧业科学院

关键词： 猪;脂蛋白酯酶;实时定量RT-PCR;TaqMan荧光探针

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2008 年 41 卷 05 期

页码： 1464-1469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆猪cDNA,作为猪LPLmRNA定量检测的标准品,建立检测方法。【方法】用RT-PCR,从猪背最长肌的总RNA中逆转录扩增LPL的cDNA,将纯化的LPLcDNA与pGM-T载体进行连接,转化宿主菌TOP10,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析,对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测。纯化质粒并检测260nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。【结果】建立了猪LPLmRNA实时定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为1×103～1×1010拷贝,阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(R2=0.9871)。【结论】成功克隆了LPL实时荧光PCR定量标准,且TaqMan荧光定量RT-PCR的方法可对猪背最长肌LPLmRNA的表达进行准确定量。

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