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一种优化的大白菜线粒体DNA提取方法

文献类型： 中文期刊

作者： 李振兴 1 ; 张德双 2 ; 司龙亭 1 ; 于拴 2 ; 张凤兰 2 ; 余阳俊 2 ; 赵岫云 2 ; 汪维红 2 ;

作者机构： 1.沈阳农业大学园艺学院

2.北京市农林科学院蔬菜研究中心

关键词： 大白菜;线粒体DNA;提取方法;变温处理;细胞质雄性不育

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 02 期

页码： 138-142

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 介绍了一种快速、大量提取大白菜线粒体DNA的方法。以大白菜黄化苗为试验材料,通过加入一定量的DNaseⅠ和RNase A酶,充分消除核基因组DNA和RNA的污染。通过加入蛋白酶K和SDS,并经2步变温处理,即先在50℃条件下温育1 h,接着在37℃条件下温育1 h,有效地提高了mtDNA产出率。经凝胶电泳和PCR等检测,结果表明:mtDNA电泳条带清晰,OD260与OD280比值为1.8左右,纯度较高;利用细胞核看家基因Actin设计引物,扩增mtDNA,没有获得扩增产物,表明mtDNA中没有核基因组污染;利用大白菜CMS96胞质不育系基因orf222设计引物,扩增不育系和保持系mtDNA,仅在不育系中扩增出670 bp的片段;利用5个随机引物进行RAPD分析,在保持系和不育系中可扩增出许多产物,且呈现出丰富的多态性,充分表明提取的mtDNA可以满足后续的分子生物学试验。该方法的创新之处在于,通过2步变温处理的方法充分裂解线粒体膜,释放大量mtDNA,有效地提高了mtDNA的产量。试验中获得的最高产出率为每克大白菜黄化苗获得18.83μg mtDNA。

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