文献类型： 中文期刊

作者： 王方昆 ¹ ; 袁秀芳 ² ; 王一成 ² ; 张存 ² ; 徐丽华 ² ; 刘思当 ² ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.山东农业大学动物科技学院,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所 杭州310021,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,山东农业大学动物科技学院,,山东泰安272018,杭州310021,杭州310021,杭州310021,杭州310021,山东泰安272018

关键词： 猪流感病毒;NS1基因;反应原性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2008 年 41 卷 02 期

页码： 587-592

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NS1基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E.coliBL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子。【结果】经终浓度5mmol·L-1乳糖诱导,SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白NS1得到大量表达,分子质量约为26kD。经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1280倍时,阳性血清的OD650值大约是阴性血清的3倍,差异明显。【结论】重组蛋白NS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性。