文献类型： 中文期刊

作者： 陈柳 ¹ ; 倪征 ¹ ; 刘可姝 ¹ ; 叶伟成 ¹ ; 华炯钢 ¹ ; 云涛 ¹ ; 朱寅初 ¹ ; 张存 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭干扰素-γ;慢病毒;CHO细胞;稳定表达

期刊名称： 浙江农业科学

ISSN： 0528-9017

年卷期： 2024 年 65 卷 001 期

页码： 208-212

摘要： 干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一.为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了 duIFN-γ 基因,插入到慢病毒表达载体 plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞 293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒 rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了 30 个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系.利用 RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的 duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了 duIFN-γ mRNA水平最高的 1 个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了 1 株稳定细胞系.Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中.本研究获得了 1 株稳定表达 duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展 duIFN-γ生物学功能研究、建立 duIFN-γ 检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础.